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竹叶黄酮类化合物的提取方法

类型:化学论文 时间:2015年1月25日

摘 要:本实验通过醇提法提取秦巴山区竹叶中的黄酮类化合物,研究了提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间、提取液pH值等因素对黄酮提取率的影响,并通过正交试验确定最佳提取工艺。结果表明:在秦巴山区竹叶中提取总黄酮类化合物提取剂用量40mL、提取剂浓度80%、提取浸泡时间30min以及提取液pH值为7.5的条件下效果最佳。

关键词:竹叶 黄酮类化合物 醇提法

竹叶在我国拥有较长的食用和医用历史,是我国认可批准的可医用、食用的天然绿色植物[1]。且竹叶里含有丰富的有机物质和人体必需的微量元素,有研究表明,竹叶里含有大量的有生理活性的黄酮类化合物,具有较高的研究采食价值[2]。在秦巴山区竹林类型多、分布广、资源含量甚多,是我国不可多得的一大宝藏。

黄酮类化合物广泛存在于植物中。有研究表明,黄酮类化合物有抗氧化、清除自由基的活性,还有一定的抗脂质过氧化能力,抑制癌细胞、抗衰老、预防老年性痴呆症等重要生理和药理作用。对于多种疾病有良好的治愈效果,医学研究及药用价值甚高[3-4]。目前,我国对黄酮类化合物的提取方法还是采用比较传统的沸水提取法、醇提法、有机溶剂萃取法。随着我国科学技术的高速发展,近年来对黄酮类化合物的提取和检测方法也有创新,如微波辅助萃取、超声波辅助萃取和超临界CO2萃取法等。对黄酮类化合物提取方法各有差异,吸引着不少科研爱好者研究[5]。

本试验采用了醇提法提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物,研究了在提取过程中不同因素对黄酮提取率的影响,并且通过正交试验的方法对提取剂用量、提取剂浓度、提取浸泡时间以及提取液pH值等因素进行研究,最终确定醇提取秦巴山区竹叶中总黄酮类化合物的最佳工艺。

1 材料与方法

1.1 原料与仪器

竹叶(采摘于秦巴山区某地);芦丁(上海生化制剂厂);无水乙醇(西安化学制剂厂,分析纯);亚硝酸钠(西安化学制剂厂,分析纯);硝酸铝(太原欣力化学品生产厂,分析纯);氢氧化钠(西安化学制剂厂,分析纯)。

FW177型中草药粉碎机(湖南中诚制药机械厂);DGG9140B型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信试验仪器有限公司);760CR紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);电子天平(上海第三分析仪器厂);旋片式真空泵(上海沪冈真空泵制造有限公司);标准检验筛(浙江上虞市道墟张兴纱筛厂);布什漏斗;抽滤瓶;烧瓶;试管;移液管;锥形瓶;容量瓶。

1.2 实验过程与方法

1.2.1 提取工艺流程

竹叶→烘干→粉碎→称样→浸泡提取→抽滤→稀释定容→样液。

1.2.2 芦丁标准曲线的建立

准确称取标准芦丁对照品38.60mg,置于50mL烧杯中,加适量50%的乙醇溶解,转至50mL容量瓶,再用少量50%乙醇洗涤烧杯2~3次转移至容量瓶并定容至刻度线,摇匀,得浓度0.7720g/L的芦丁标准对照试液。

精确移取芦丁标准对照试液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分别置于25mL容量瓶中,各加50%的乙醇至10mL,再分别加配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL,摇匀放置6min,加质量分数10%的硝酸铝溶液1mL,摇匀放置6min,加质量分数5%的氢氧化钠溶液10mL,最后用50%的乙醇定容至刻度线,摇匀放置15min。以50%的乙醇作参比溶液,于500nm处测定吸光度。以芦丁标准对照试液浓度c(g/L)为横坐标,以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线(见图1),得到芦丁标准对照试液浓度c与吸光度A关系的线性回归方程:A=0.5706c+0.0088(R2=0.9960)。

1.3 样液制备

将在秦巴山区采摘的竹叶清洗干净,放于干燥箱干燥,等完全干燥后取出进行粉碎,用100目标准检验筛筛选,取其样品干燥粉末。

准确称取样品干燥粉末1.0000g(±0.0020)若干份,加入一定浓度的乙醇提取剂若干毫升,调整提取液一定pH值,在室温下提取浸泡一定时间后抽滤,转移滤液于100mL容量瓶中,用一定浓度提取剂稀释、定容至刻度线,准确量取上清液1mL于50mL容量瓶中,分别加入配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL,摇匀放置6min,加质量分数10%的

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